ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోప్‌లో ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్ ఒక ముఖ్యమైన భాగం. ఒక సాధారణ సిస్టమ్‌లో మూడు ప్రాథమిక ఫిల్టర్‌లు ఉంటాయి: ఎక్సైటేషన్ ఫిల్టర్, ఎమిషన్ ఫిల్టర్ మరియు డైక్రోయిక్ మిర్రర్. అవి సాధారణంగా క్యూబ్‌లో ప్యాక్ చేయబడతాయి, తద్వారా సమూహం మైక్రోస్కోప్‌లోకి చొప్పించబడుతుంది.
ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్ ఎలా పని చేస్తుంది?
ఉత్తేజిత వడపోత
ఉత్తేజిత ఫిల్టర్‌లు నిర్దిష్ట తరంగదైర్ఘ్యం యొక్క కాంతిని ప్రసారం చేస్తాయి మరియు ఇతర తరంగదైర్ఘ్యాలను నిరోధిస్తాయి. ఒక రంగును మాత్రమే అనుమతించేలా ఫిల్టర్‌ను ట్యూన్ చేయడం ద్వారా విభిన్న రంగులను ఉత్పత్తి చేయడానికి వాటిని ఉపయోగించవచ్చు. ఉత్తేజిత ఫిల్టర్‌లు రెండు ప్రధాన రకాలుగా వస్తాయి - లాంగ్ పాస్ ఫిల్టర్‌లు మరియు బ్యాండ్ పాస్ ఫిల్టర్‌లు. ఎక్సైటర్ అనేది సాధారణంగా బ్యాండ్‌పాస్ ఫిల్టర్, ఇది ఫ్లోరోఫోర్ ద్వారా శోషించబడిన తరంగదైర్ఘ్యాలను మాత్రమే దాటిపోతుంది, తద్వారా ఫ్లోరోసెన్స్ యొక్క ఇతర మూలాల ఉత్తేజాన్ని తగ్గిస్తుంది మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ ఎమిషన్ బ్యాండ్‌లో ఉత్తేజిత కాంతిని నిరోధించడం. చిత్రంలో నీలిరంగు గీత ద్వారా చూపబడినట్లుగా, BP 460-495, అంటే ఇది 460-495nm యొక్క ఫ్లోరోసెన్స్ గుండా మాత్రమే వెళుతుంది.
ఇది ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోప్ యొక్క ప్రకాశం మార్గంలో ఉంచబడుతుంది మరియు ఫ్లోరోఫోర్ ఉత్తేజిత పరిధి మినహా కాంతి మూలం యొక్క అన్ని తరంగదైర్ఘ్యాలను ఫిల్టర్ చేస్తుంది. ఫిల్టర్ కనీస ప్రసారం చిత్రాల ప్రకాశం మరియు ప్రకాశాన్ని నిర్దేశిస్తుంది. ఏదైనా ఎక్సైటేషన్ ఫిల్టర్ కోసం కనీసం 40% ట్రాన్స్‌మిషన్ సిఫార్సు చేయబడింది, అంటే ట్రాన్స్‌మిషన్ ఆదర్శంగా >85%. ఉత్తేజిత వడపోత యొక్క బ్యాండ్‌విడ్త్ పూర్తిగా ఫ్లోరోఫోర్ ఉత్తేజిత పరిధిలో ఉండాలి అంటే ఫిల్టర్ యొక్క మధ్య తరంగదైర్ఘ్యం (CWL) ఫ్లోరోఫోర్ యొక్క గరిష్ట ఉత్తేజిత తరంగదైర్ఘ్యానికి వీలైనంత దగ్గరగా ఉంటుంది. ఎక్సైటేషన్ ఫిల్టర్ ఆప్టికల్ డెన్సిటీ (OD) నేపథ్య చిత్రం చీకటిని నిర్దేశిస్తుంది; OD అనేది ప్రసార పరిధి లేదా బ్యాండ్‌విడ్త్ వెలుపల ఉన్న తరంగదైర్ఘ్యాలను ఫిల్టర్ ఎంతవరకు బ్లాక్ చేస్తుందో కొలమానం. కనిష్ట OD 3.0 సిఫార్సు చేయబడింది కానీ 6.0 లేదా అంతకంటే ఎక్కువ OD అనువైనది.
ఉద్గార వడపోత
ఉద్గార ఫిల్టర్‌లు నమూనా నుండి కావాల్సిన ఫ్లోరోసెన్స్‌ను డిటెక్టర్‌ను చేరుకోవడానికి అనుమతించే ఉద్దేశ్యాన్ని అందిస్తాయి. అవి తక్కువ తరంగదైర్ఘ్యాలను నిరోధిస్తాయి మరియు ఎక్కువ తరంగదైర్ఘ్యాలకు అధిక ప్రసారాన్ని కలిగి ఉంటాయి. ఫిల్టర్ రకం కూడా సంఖ్యతో అనుబంధించబడింది, ఉదా. చిత్రంలో BA510IF (జోక్యం అవరోధం వడపోత), ఆ హోదా దాని గరిష్ట ప్రసారంలో 50% తరంగదైర్ఘ్యాన్ని సూచిస్తుంది.
ఉద్గార ఫిల్టర్ల కోసం అదే సిఫార్సులు ఉద్గార ఫిల్టర్ల కోసం నిజమైనవి: కనీస ప్రసారం, బ్యాండ్‌విడ్త్, OD మరియు CWL. ఆదర్శవంతమైన CWL, మినిమమ్ ట్రాన్స్‌మిషన్ మరియు OD కలయికతో కూడిన ఎమిషన్ ఫిల్టర్ ప్రకాశవంతమైన సాధ్యమైన చిత్రాలను, సాధ్యమైనంత లోతైన బ్లాకింగ్‌తో అందిస్తుంది మరియు బలహీనమైన ఉద్గార సంకేతాలను గుర్తించడాన్ని నిర్ధారిస్తుంది.
డైక్రోయిక్ మిర్రర్
డైక్రోయిక్ మిర్రర్ ఎక్సైటేషన్ ఫిల్టర్ మరియు ఎమిషన్ ఫిల్టర్ మధ్య 45° కోణంలో ఉంచబడుతుంది మరియు డిటెక్టర్ వైపు ఉద్గార సంకేతాన్ని ప్రసారం చేస్తున్నప్పుడు ఫ్లోరోఫోర్ వైపు ఉత్తేజిత సంకేతాన్ని ప్రతిబింబిస్తుంది. ఐడియల్ డైక్రోయిక్ ఫిల్టర్‌లు మరియు బీమ్ స్ప్లిటర్‌లు గరిష్ట ప్రతిబింబం మరియు గరిష్ట ప్రసారాల మధ్య పదునైన పరివర్తనలను కలిగి ఉంటాయి, ఎక్సైటేషన్ ఫిల్టర్ యొక్క బ్యాండ్‌విడ్త్ కోసం > 95% ప్రతిబింబం మరియు ఉద్గార వడపోత యొక్క బ్యాండ్‌విడ్త్ కోసం > 90% ప్రసారం ఉంటుంది. ఫ్లోరోఫోర్ యొక్క ఖండన తరంగదైర్ఘ్యం (λ)ను దృష్టిలో ఉంచుకుని, స్ట్రా-లైట్‌ను తగ్గించడానికి మరియు ఫ్లోరోసెంట్ ఇమేజ్ సిగ్నల్-టు-నాయిస్ రేషియోను గరిష్టీకరించడానికి ఫిల్టర్‌ను ఎంచుకోండి.
ఈ చిత్రంలో ఉన్న డైక్రోయిక్ మిర్రర్ DM505, ఈ అద్దం యొక్క గరిష్ట ప్రసారంలో 50% తరంగదైర్ఘ్యం 505 నానోమీటర్లు కాబట్టి దీనికి పేరు పెట్టారు. ఈ అద్దం యొక్క ప్రసార వక్రత 505 nm పైన అధిక ప్రసారాన్ని చూపుతుంది, 505 నానోమీటర్ల ఎడమ వైపున ప్రసారంలో బాగా తగ్గుదల మరియు 505 నానోమీటర్ల ఎడమవైపు గరిష్ట పరావర్తనాన్ని చూపుతుంది, అయితే ఇప్పటికీ 505 nm కంటే తక్కువ ప్రసారాన్ని కలిగి ఉండవచ్చు.
లాంగ్ పాస్ మరియు బ్యాండ్ పాస్ ఫిల్టర్ల మధ్య తేడా ఏమిటి?
ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్‌లను రెండు రకాలుగా విభజించవచ్చు: లాంగ్ పాస్ (LP) మరియు బ్యాండ్ పాస్ (BP).
లాంగ్ పాస్ ఫిల్టర్‌లు పొడవైన తరంగదైర్ఘ్యాలను ప్రసారం చేస్తాయి మరియు తక్కువ వాటిని బ్లాక్ చేస్తాయి. కట్-ఆన్ తరంగదైర్ఘ్యం అనేది పీక్ ట్రాన్స్‌మిషన్‌లో 50% విలువ, మరియు కట్-ఆన్ పైన ఉన్న అన్ని తరంగదైర్ఘ్యాలు లాంగ్ పాస్ ఫిల్టర్ల ద్వారా ప్రసారం చేయబడతాయి. అవి తరచుగా డైక్రోయిక్ మిర్రర్స్ మరియు ఎమిషన్ ఫిల్టర్లలో ఉపయోగించబడతాయి. అనువర్తనానికి గరిష్ట ఉద్గార సేకరణ అవసరమైనప్పుడు మరియు వర్ణపట వివక్ష అవసరం లేనప్పుడు లాంగ్‌పాస్ ఫిల్టర్‌లను ఉపయోగించాలి, ఇది సాధారణంగా తక్కువ స్థాయి బ్యాక్‌గ్రౌండ్ ఆటోఫ్లోరోసెన్స్ ఉన్న నమూనాలలో ఒకే ఉద్గార జాతులను ఉత్పత్తి చేసే ప్రోబ్‌ల విషయంలో ఉంటుంది.
బ్యాండ్ పాస్ ఫిల్టర్‌లు నిర్దిష్ట తరంగదైర్ఘ్య బ్యాండ్‌ను మాత్రమే ప్రసారం చేస్తాయి మరియు ఇతరులను బ్లాక్ చేస్తాయి. ఫ్లోరోఫోర్ ఉద్గార స్పెక్ట్రం యొక్క బలమైన భాగాన్ని మాత్రమే ప్రసారం చేయడానికి అనుమతించడం ద్వారా అవి క్రాస్‌స్టాక్‌ను తగ్గిస్తాయి, ఆటోఫ్లోరోసెన్స్ శబ్దాన్ని తగ్గిస్తాయి మరియు తద్వారా అధిక నేపథ్య ఆటోఫ్లోరోసెన్స్ నమూనాలలో సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తిని మెరుగుపరుస్తాయి, వీటిని లాంగ్ పాస్ ఫిల్టర్‌లు అందించలేవు.
బెస్ట్‌స్కోప్ ఎన్ని రకాల ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్ సెట్‌లను సరఫరా చేయగలదు?
కొన్ని సాధారణ రకాల ఫిల్టర్లలో నీలం, ఆకుపచ్చ మరియు అతినీలలోహిత ఫిల్టర్‌లు ఉన్నాయి. పట్టికలో చూపిన విధంగా.
| ఫిల్టర్ సెట్ | ఉత్తేజిత వడపోత | డైక్రోయిక్ మిర్రర్ | బారియర్ ఫిల్టర్ | LED దీపం వేవ్ పొడవు | అప్లికేషన్ |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: ఫ్లోరోసెంట్ యాంటీబాడీ పద్ధతి ·ఆసిడిన్ ఆరెంజ్: DNA, RNA ·ఆరమైన్: ట్యూబర్‌కిల్ బాసిల్లస్ ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·రోడమైన్, TRITC: ఫ్లోరోసెంట్ యాంటీబాడీ పద్ధతి ప్రొపిడియం అయోడైడ్: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | ·ఆటో-ఫ్లోరోసెన్స్ పరిశీలన ·DAPI: DNA మరక ·Hoechest 332528, 33342: క్రోమోజోమ్ స్టెయినింగ్ కోసం ఉపయోగిస్తారు |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · కాటెకోలమైన్లు · 5-హైడ్రాక్సీ ట్రిప్టమైన్ ·టెట్రాసైక్లిన్: అస్థిపంజరం, దంతాలు |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·అలెక్సా ఫ్లోర్ 633, అలెక్సా ఫ్లోర్ 647 |
ఫ్లోరోసెన్స్ సముపార్జనలలో ఉపయోగించే ఫిల్టర్ సెట్‌లు ఫ్లోరోసెన్స్ అప్లికేషన్‌లలో ఉపయోగించే ప్రధాన తరంగదైర్ఘ్యాల చుట్టూ రూపొందించబడ్డాయి, ఇవి ఎక్కువగా ఉపయోగించే ఫ్లోరోఫోర్స్ చుట్టూ ఉంటాయి. ఈ కారణంగా, అవి DAPI (నీలం), FITC (ఆకుపచ్చ) లేదా TRITC (ఎరుపు) ఫిల్టర్ క్యూబ్‌లు వంటి ఇమేజింగ్ కోసం ఉద్దేశించిన ఫ్లోరోఫోర్ పేరు మీద కూడా పేరు పెట్టబడ్డాయి.
| ఫిల్టర్ సెట్ | ఉత్తేజిత వడపోత | డైక్రోయిక్ మిర్రర్ | బారియర్ ఫిల్టర్ | LED దీపం వేవ్ పొడవు |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-ఆరమైన్ | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| టెక్సాస్ రెడ్ | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
మీరు ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్‌ని ఎలా ఎంచుకుంటారు?
1. ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్‌ను ఎంచుకునే సూత్రం ఏమిటంటే, ఫ్లోరోసెన్స్/ఎమిషన్ లైట్‌ను వీలైనంత వరకు ఇమేజింగ్ ముగింపు గుండా వెళ్లనివ్వండి మరియు అత్యధిక సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తిని పొందేందుకు, అదే సమయంలో ఉత్తేజిత కాంతిని పూర్తిగా నిరోధించడం. ప్రత్యేకించి మల్టీఫోటాన్ ఉత్తేజితం మరియు టోటల్ ఇంటర్నల్ రిఫ్లెక్షన్ మైక్రోస్కోప్ అప్లికేషన్ కోసం, బలహీనమైన శబ్దం కూడా ఇమేజింగ్ ప్రభావానికి గొప్ప జోక్యాన్ని కలిగిస్తుంది, కాబట్టి సిగ్నల్ టు నాయిస్ రేషియో అవసరం ఎక్కువగా ఉంటుంది.
2. ఫ్లోరోఫోర్ యొక్క ఉత్తేజితం మరియు ఉద్గార వర్ణపటాన్ని తెలుసుకోండి. బ్లాక్ బ్యాక్‌గ్రౌండ్‌తో హై-క్వాలిటీ, హై-కాంట్రాస్ట్ ఇమేజ్‌ని రూపొందించే ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్ సెట్‌ను రూపొందించడానికి, ఎక్సైటేషన్ మరియు ఎమిషన్ ఫిల్టర్‌లు ఫ్లోరోఫోర్ ఎక్సైటేషన్ పీక్స్ లేదా ఎమిషన్‌లకు అనుగుణంగా ఉండే ప్రాంతాలపై కనిష్ట పాస్‌బ్యాండ్ అలలతో అధిక ప్రసారాన్ని సాధించాలి.
3. ఫ్లోరోసెన్స్ ఫిల్టర్ల మన్నికను పరిగణించండి. ఈ ఫిల్టర్‌లు తప్పనిసరిగా "బర్న్‌అవుట్"కి దారితీసే అతినీలలోహిత (UV) కాంతిని ఉత్పత్తి చేసే తీవ్రమైన కాంతి వనరులకు అభేద్యంగా ఉండాలి, ప్రత్యేకించి ఎక్సైటర్ ఫిల్టర్‌ని ఇల్యూమినేషన్ సోర్స్ యొక్క పూర్తి తీవ్రతకు గురిచేస్తుంది.
విభిన్న ఫ్లోరోసెంట్ నమూనా చిత్రాలు
వనరులు ఇంటర్నెట్‌లో సేకరించబడతాయి మరియు నిర్వహించబడతాయి మరియు నేర్చుకోవడం మరియు కమ్యూనికేషన్ కోసం మాత్రమే ఉపయోగించబడతాయి. ఏదైనా ఉల్లంఘన ఉంటే, దయచేసి తొలగించడానికి మమ్మల్ని సంప్రదించండి.
పోస్ట్ సమయం: డిసెంబర్-09-2022